호기성 미생물의 작용에 의한 것이므로 충분한 용존 산소가 필요하다.

희석수에 완충액으로써 MgSO₄, CaCl₂, FeCl₃를 첨가한다.

희석수를 식종하는 경우 5일후의 산소 감소율이 40∼70%되는 것이 적당하다.

시료가 산성 또는 알칼리성을 나타내거나 잔료염소등 산화성물질을 함유하였거나 용존산소가 과포화 되어있을 때에는 전처리를 행한다.