병원체는 분리되어 배지에서 순수 배양되지 않을 수도 있다.

발병한 부위로부터 접종에 사용하였던 것과 동일한 병원체가 재분리되어야 한다.

병환부에는 그 병을 일으키는 것으로 추정되는 병원체가 항상 존재하여야 한다.

순수 배양한 병원체를 건전한 기주에 접종하였을 때 동일한 병이 발생하여야한다.