병든 생물에 병원체로 의심되는 특정 미생물이 존재해야 한다.

특정 미생물은 기주생물로부터 분리되고 배지에서 순수 배양되어야 한다.

순수배양한 미생물을 동일 기주에 접종하였을 때 동일한 병이 발생하여야 한다.

병든 생물체로부터 접종할 때 사용하였던 미생물과 동일한 특성의 미생물은 재분리 배양되어서는 아니된다.