병원균은 반드시 환부에 존재한다.

분리된 병원균은 인공 배지상에서 배양될 수 있어야 한다.

배양한 병원균을 접종하여 동일한 병이 발생 되어야 한다.

발병한 환부에서 접종균과 도일한 병원균이 재분리 되어야 한다.