미생물은 반드시 환부에 존재해야 한다.

미생물은 분리되어 배지상에서 순수 배양되어야 한다.

순수배양된 미생물을 분리하여 동정해야 한다.

발병한 피해부에서 접종에 사용한 미생물과 같은 성질을 가진 미생물이 재분리 되어야 한다.